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Combinación de diferentes anticuerpos

Combinación de diferentes anticuerpos


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¿Cómo puedo saber si puedo combinar anticuerpos anti Cenp-C y anti Rod1? Quiero usarlos para etiquetar esas proteínas y analizar las células mediante microscopía de fluorescencia.

* Cenp-C es una proteína cinetocoro y Rod1 se localiza en los cinetocoros o microtúbulos del huso durante la división celular.

¿Puedo combinarlos si son de diferentes animales? ¿Cómo puedo saber que no tendrán reactividad cruzada?

Gracias


Si están hechos en diferentes animales, debería estar bien. Sin embargo, podrías hacer un western con esos anticuerpos, para comprobarlo. Parece que Cenp-C tiene unos 106 kD y Rod1 unos 60 kD. Entonces, en un western, si ve bandas en ambos tamaños con uno de los anticuerpos, tiene reactividad cruzada entre esas proteínas. Y si solo ves la banda específica que estás buscando, estás bien.


Cómo los anticuerpos defienden su cuerpo

Los anticuerpos (también llamados inmunoglobulinas) son proteínas especializadas que viajan por el torrente sanguíneo y se encuentran en los fluidos corporales. Son utilizados por el sistema inmunológico para identificar y defenderse de intrusos extraños en el cuerpo.

Estos intrusos extraños, o antígenos, incluyen cualquier sustancia u organismo que provoque una respuesta inmunitaria.

Los ejemplos de antígenos que causan respuestas inmunitarias incluyen

Los anticuerpos reconocen antígenos específicos identificando ciertas áreas en la superficie del antígeno conocidas como determinantes antigénicos. Una vez que se reconoce el determinante antigénico específico, el anticuerpo se unirá al determinante. El antígeno se etiqueta como intruso y se etiqueta para su destrucción por otras células inmunes. Los anticuerpos protegen contra sustancias antes de la infección celular.


Combinación de diferentes anticuerpos - Biología

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IgM (inmunoglobulina M)

La IgM constituye aproximadamente el 13% de los anticuerpos séricos y es el primer anticuerpo producido durante una respuesta inmune. La IgM se encuentra principalmente en el torrente sanguíneo y no en los espacios intracelulares de los tejidos, donde puede controlar las infecciones en la sangre. La IgM tiene una vida media de aproximadamente 5 días. La IgM es un pentámero y tiene 10 sitios de unión a epítopos (Figura ( PageIndex <13> ). 3.5).

Figura ( PageIndex <13> ). 3.5: IgM es un pentámero y, por lo tanto, tiene 10 sitios Fab.

Las porciones Fc de IgM pueden activar la ruta clásica del complemento. La IgM es la clase de anticuerpo más eficaz para activar la vía clásica del complemento. Las formas monoméricas de IgM se encuentran en la superficie de los linfocitos B como receptores de células B.


Los 4 tipos principales de interacción antígeno-anticuerpo

Los siguientes puntos destacan los cuatro tipos principales de interacción antígeno-anticuerpo. Los tipos son: 1. Afinidad del anticuerpo 2. Avidez del anticuerpo 3. Reactividad cruzada en la reacción antígeno-anticuerpo 4. Reacción de precipitación.

Tipo # 1. Afinidad de anticuerpos:

La fuerza de las interacciones no covalentes totales entre un solo sitio de unión a antígeno (idiotopo) en un anticuerpo y un solo epítopo es la afinidad del anticuerpo por ese epítopo. Los anticuerpos con alta afinidad se unen al antígeno con más fuerza y ​​no se disocian inmediatamente del antígeno, mientras que el anticuerpo con baja afinidad se une débilmente y puede ser fácilmente disociable.

La asociación entre un sitio de unión en un anticuerpo (Ab) con un antígeno monovalente (Ag) se puede representar como:

La constante de asociación & # 8216k & # 8217 es una medida de afinidad que se puede calcular claramente a partir de la relación entre la concentración del complejo Ag-Ab unido y la concentración de antígeno no unido y de anticuerpos similares.

El valor de & # 8216k & # 8217 varía para diferentes complejos Ag-Ab y depende tanto de k1. K1 se expresa en litros / mol / segundo (l / mol / s) y k1 se expresa en 1 / segundo. El papel de k1 al determinar la constante de asociación & # 8216k & # 8217 para varias interacciones Ag-Ab se puede representar en la Tabla 5.1.

Un buen ejemplo de muestra de afinidad puede representarse con pequeños haptenos & # 8217s, por ejemplo, conjugados de dinitrofenilo (DNP) y el anticuerpo se une entre sí y cada grupo de DNP se une en el sitio de combinación anti & shybody. Por tanto, los pequeños haptenos son monovalentes. La constante de asociación k puede determinarse mediante diálisis de equilibrio [cuadro 5.1 y figura 5.3].

Escribe # 2. Avidez de anticuerpos:

Cuando se mezclan antígenos complejos que tienen múltiples determinantes antigénicos repetidos con anticuerpos de múltiples sitios de unión, la interacción entre el anticuerpo y el antígeno en un sitio aumentará la probabilidad de reacción en un segundo sitio. La afinidad en un sitio de unión no siempre refleja la verdadera fuerza de la interacción anticuerpo-antígeno.

La fuerza de tales interacciones múltiples entre un anticuerpo multivalente y un antígeno se llama avidez. La avidez de un anticuerpo es una mejor medida de su capacidad de unión y timidez dentro del sistema biológico. La alta avidez puede compensar la baja afinidad. Como, por ejemplo, la IgM pentamérica secretada a menudo tiene una afinidad menor que la IgG, pero la IgM tiene una alta avidez.

Escribe # 3. Reactividad cruzada en la reacción antígeno-anticuerpo:

La reacción antígeno-anticuerpo es muy específica, pero a veces pocos antígenos muestran reactividad cruzada con algunos anticuerpos no relacionados. La reactividad cruzada ocurre cuando dos antígenos diferentes comparten un epítopo idéntico y cuando un anticuerpo específico para un antígeno específico también puede unirse con otro antígeno con una estructura más o menos similar de su epítopo. La reactividad cruzada puede explicarse bien por las glicoproteínas presentes en los glóbulos rojos de los antígenos del grupo sanguíneo ABO, (tabla 5.2) que son derivados de polisacáridos con diferentes moléculas terminales de azúcar.

Varios virus y bacterias a veces poseen determinantes antigénicos similares a los componentes de la célula huésped. El anticuerpo es generado por ellos mediante reacción cruzada con antígenos de la célula huésped. Como resultado de esta reactividad cruzada, algunas veces las enfermedades autoinmunes comienzan a dañar los tejidos (Fig. 5.4).

Escribe # 4. Reacción de precipitación:

La interacción entre un anticuerpo y un antígeno soluble en solución acuosa forma una red que finalmente desarrolla un precipitado visible. Los anticuerpos que pueden agregar antígenos solubles se denominan precipitinas. Requiere un tiempo para que se desarrolle un precipitado. El precipitado, que alcanza la insolubilidad debido a la formación de un enlace iónico con moléculas de antígeno-anticuerpo, ayuda a perder su carga.

La formación de la red de Ag-Ab depende de la valencia tanto del antígeno como del anticuerpo, a este respecto:

I. El anticuerpo debe ser bivalente y no se formará un precipitado con fragmentos F (ab) monovalentes.

ii. El antígeno debe ser bivalente o polivalente, debe tener al menos dos copias del mismo epítopo o tener diferentes epítopos que reaccionen con diferentes anticuerpos presentes en los antisueros policlonales (Fig. 5.5 y 5.6).


Anticuerpos del sistema inmunológico de las mucosas

Los anticuerpos sintetizados por el sistema inmunológico de las mucosas incluyen IgA e IgM. Las células B activadas se diferencian en células plasmáticas de la mucosa que sintetizan y secretan IgA dimérica y, en menor grado, IgM pentamérica. La IgA secretada abunda en las lágrimas, la saliva, la leche materna y en las secreciones de los tractos gastrointestinal y respiratorio. La secreción de anticuerpos da como resultado una respuesta humoral local en las superficies epiteliales y previene la infección de la mucosa mediante la unión y neutralización de patógenos.


Discusión

La capacidad de algunas moléculas de Ab para unirse a un gran panel de antígenos estructuralmente diversos se conoce como poliespecificidad de unión o polirreactividad de Abs. Es común creer que el & # x02018pocket & # x02019 de unión a antígeno de muchas moléculas de Ab puede ser flexible y puede cambiar la conformación para adaptarse a diferentes antígenos, lo que conduce a polirreactividad de unión a Ab. Sin embargo, la afinidad de los Abs polirreactivos por los antígenos específicos suele ser varios órdenes de magnitud mayor que su afinidad por los antígenos no específicos [31,33]. Algunas enzimas canónicas también pueden interactuar con ligandos inespecíficos [32]. Sin embargo, la afinidad de tales enzimas por sus sustratos específicos suele ser al menos 1 & # x020133 órdenes de magnitud mayor que para los ligandos inespecíficos [32], [35]. Se cree ampliamente que todos los cambios dependientes de enzimas en la conformación del sustrato son necesarios para una alineación muy precisa de los orbitales electrónicos de los átomos que reaccionan; solo se puede lograr para sustratos específicos [32], [35]. Por lo tanto, para muchas enzimas, el paso de ajuste conformacional de la reacción, en contraste con la unión menos específica, es extremadamente sensible a elementos específicos del sustrato, y es el paso catalítico el que determina las velocidades de reacción para diferentes sustratos [32], [ 35]. En contraste con la encuadernación, el k gato aumenta en 5 & # x020138 órdenes de magnitud tras una transición de ligandos inespecíficos a sustratos específicos [32], [35]. En general, la unión no específica se produce de forma ubicua, mientras que la catálisis no específica es extremadamente rara.

Era razonable esperar que todos los Abs y abzimas que interactúan de forma inespecífica con diferentes sorbentes de afinidad puedan eluirse de los sorbentes mediante & # x022640.1 & # x020130.5 M NaCl [5], [6], [33]. Teniendo en cuenta estos datos y la muy alta especificidad de las enzimas en la etapa de la catálisis [5], [6], [33], [35], fue sorprendente que las abzimas sIgA de la leche humana que catalizan varias reacciones químicas muy diferentes posean muy alta afinidad para todos los sorbentes de afinidad usados ​​(Figs. 2, & # x200B, 3, 3, & # x200B, 4, 4, & # x200B, 5). 5). Algunas fracciones de estas abzimas podrían eluirse de todos los sorbentes solo en las condiciones que destruyen exclusivamente complejos inmunes muy específicos. Estos datos no pudieron explicarse dentro del marco actual de comprensión de la poliespecificidad de unión de Ab. Dado que hemos demostrado que las preparaciones de sIgA no contienen ninguna enzima canónica, la presencia de moléculas de sIgA polifuncionales con diferentes tipos de fragmentos de HL en la leche materna puede, en principio, explicar los resultados de la separación de sIgA de la leche en diferentes sorbentes de afinidad (Figs.2 , & # x200B, 3, 3, & # x200B, 4, 4, & # x200B, 5 5).

El intercambio se demostró primero sólo entre dos moléculas de IgG4, pero no entre IgG de otras subclases [25] & # x02013 [28]. Se propuso que las moléculas de IgG4 pueden intercambiarse por medio fragmentos HL de los anticuerpos [25] & # x02013 [28]. Recientemente hemos demostrado que las IgG de la leche humana frente a diferentes antígenos se someten a un extenso intercambio de semimoléculas [29]. En el conjunto de IgG, solo el 33 & # x000b15% y el 13 & # x000b15% de los Abs contenían cadenas ligeras exclusivamente de tipo kappa o lambda, respectivamente, mientras que el 54 & # x000b110% de las IgG contenían cadenas ligeras kappa y lambda. Además, se demostró que las moléculas de IgG no pueden intercambiarse sólo mediante cadenas ligeras o pesadas, lo que puede conducir a la formación de Abs con una combinación funcional anormal de partes variables de las cadenas H y L a diferentes antígenos [29].

Una forma directa de distinguir las moléculas de sIgA que contienen dos o más fragmentos HL diferentes era revelar una posible existencia de & # x003ba - & # x003bb-sIgAs quiméricos. Se demostró que solo el 35 & # x000b15% y el 48 & # x000b17% de las sIgAs totales demostraron una afinidad no superpuesta por las cadenas ligeras de tipo & # x003bb- o & # x003ba, respectivamente, mientras que el 17 & # x000b14% de las sIgAs efectivamente interactuó tanto con anti - & # x003bb-L-Sepharose como con anti - & # x003ba-L-Sepharose. Por lo tanto, era razonable sugerir que, de manera similar a las IgG [29], es posible la existencia de sIgAs polifuncionales en la leche materna como resultado de algún tipo de intercambio específico entre & # x003bb - & # x003bb-, & # x003ba - & # Moléculas x003ba-Abs. La pregunta era ¿dónde y cómo puede ocurrir la formación de moléculas de sIgA quiméricas de & # x003bb - & # x003ba?

En la actualidad, la fuente de IgG en la leche todavía se debate; puede ser parcialmente sintetizada localmente por células específicas de la glándula mamaria y parcialmente transferida desde el sistema de circulación sanguínea de la madre [1], [2]. In vitro el intercambio extenso de IgG de la leche, 25 & # x0201360%, se encontró solo en presencia de glutatión reducido junto con plasma humano y estuvo de acuerdo con un contenido relativo de IgG quimérico en la leche fresca [29]. Significa que el intercambio específico de semimoléculas de IgG puede ocurrir directamente en la leche materna. Sin embargo, in vitro El intercambio de semimoléculas de sIgAs de la leche en presencia de glutatión reducido y plasma humano es aproximadamente 1,5% menos intenso que el de las IgG (por ejemplo, Fig. 8D). Se puede suponer que, de manera similar a las IgG, las moléculas de sIgA en la leche solo experimentan un intercambio de media molécula por fragmentos HL, pero no pueden intercambiar solo cadenas ligeras o pesadas. A este respecto, cabe mencionar que nuestras preparaciones de sIgA son mezclas de sIgA1 oligomérico de & # x0223c370 kDa y sIgA2 de & # x0223c300 kDa en sIgA2, las cadenas ligeras no están unidas covalentemente al oligómero por enlaces disulfuro y las subunidades ligeras se pierden bajo las duras condiciones de la purificación de Ab (Fig. 1A, líneas 1 y 2). Curiosamente, no observamos un intercambio significativo entre diferentes moléculas de las preparaciones de sIgA total que contienen sIgA1 y sIgA2 en ausencia o en presencia de solo GSH o solo plasma de leche. Dado que las moléculas de sIgA2 no contienen cadenas ligeras, es probable que in vitro sólo sIgA1 puede sufrir un intercambio de semimoléculas en presencia de GSH y enzimas específicas del plasma de la leche (ver más abajo). Esta es una posible razón detrás de la menor eficiencia de intercambio en el caso de sIgA en comparación con IgG. Sin embargo, no excluye la posibilidad de un intercambio de media molécula entre moléculas intactas de sIgA2 que contienen cadenas ligeras en la leche materna.

Cabe mencionar que no podemos excluir que H2L2-H2L2-SJ moléculas oligoméricas de sIgA1 y sIgA2 pueden, en principio, entrar en organismos de madres a través de intercambio adicional por H2L2-fragmentos. De acuerdo con todos los datos obtenidos, incluida la actividad relativa de sIgAs en la catálisis de diferentes reacciones después de cromatografías en varios sorbentes de afinidad, un contenido relativo de sIgAs quiméricos de leche que contienen fragmentos HL de diferentes antígenos puede ser comparable con el de las IgG. A este respecto, deben tenerse en cuenta algunos otros datos.

De manera similar a las IgG, existen inmunoglobulinas de tipo A (IgA) en la sangre humana como H2L2 dímeros. Las IgA son producidas por linfocitos B del sistema inmunológico local de la glándula mamaria y están presentes en las células linfoides del parche Payer & # x02019s (duodeno), que migran a los sitios de la mucosa, donde en la barrera láctea específica se asocian con el componente secretor (S) y unir la cadena (J) formando tetramérico H4L4Oligómeros SJ sIgA. Recientemente hemos demostrado que el conjunto de sueros IgG de sangre de donantes sanos contiene aproximadamente de 4 a 8% de IgG quiméricas & # x003bb - & # x003ba (comunicación personal de Sedykh y Nevinsky). Por lo tanto, podemos suponer que, de manera similar a las IgG, un pequeño porcentaje de IgA puede sufrir un intercambio de media molécula incluso en la sangre antes de la migración al sistema mucoso. La Fig. 9 muestra esquemáticamente este tipo de intercambio posible (hipotético). Además, no se puede excluir que durante la penetración a través del componente secretor de la barrera láctea específica se puedan combinar moléculas de IgA diméricas contra antígenos muy diferentes, así como IgA que contienen cadenas ligeras de los tipos lambda y kappa (Fig. 9). Por tanto, podemos suponer que la leche humana puede contener moléculas de sIgA oligoméricas que contienen fragmentos de HL de uno a cuatro antígenos diferentes (Fig. 9). En este caso, debido a la alta afinidad de un fragmento de HL por uno de los muchos antígenos diferentes (ADN, ATP, oligosacárido, lípido, proteína, etc.), algunas moléculas de sIgA pueden interactuar con sorbentes de afinidad que llevan un antígeno inmovilizado, mientras que de uno a tres de otros fragmentos de HL pueden interactuar eficazmente con otros antígenos diferentes, incluida la siguiente catálisis en el caso de fragmentos de HL que poseen actividades catalíticas. Esta suposición es consistente con los datos sobre la cromatografía y recromatografía de sIgAs en varios sorbentes de afinidad y la distribución de todas las actividades en el perfil de cada una de estas cromatografías (Figs. 2, & # x200B, 3, 3, & # x200B, 4, 4, & # x200B, 5) 5) así como con la existencia de & # x003bb - & # x003ba-sIgAs quiméricos.

Es posible un intercambio de media molécula de IgAs en la sangre, mientras que una formación de tetramérico tetramérico quimérico, trivalente y cuatrivalente es posible en la sangre.4L4Las moléculas SJ de sIgAs de IgA mono y bivalentes contra diferentes antígenos pueden ocurrir bajo la penetración de IgA a través de la barrera láctea específica, que se asocia con la combinación de dos moléculas de Ab con el componente secretor (S) y la cadena de unión (J). En el caso de IgA contra tres antígenos diferentes, puede haber formación de anticuerpos mono-, di- y trivalentes solamente, mientras que para cuatro o más IgA diferentes puede ocurrir la formación de Abs tetravalentes.

Dado que el intercambio extenso ocurre solo en presencia de GSH junto con plasma de leche, es razonable sugerir que algunos componentes de la leche, muy probablemente proteína (s) y / o enzima (s) (de manera similar a la disulfuro isomerasa y / o FcRn en el caso de IgG4 [25] & # x02013 [28]) puede estimular el intercambio.

El fenómeno del intercambio debería conducir a un aumento de la poliespecificidad de los Abs policlonales y a la actividad catalítica cruzada observada por nosotros por primera vez para las IgG y sIgA de la leche.


La biología estructural revela un nuevo objetivo para neutralizar COVID-19

Uno de los cinco microscopios crioelectrónicos Titan Krios utilizados en eBIC para análisis de partículas individuales y crio-tomografía en Diamond Light Source para el trabajo en este artículo. Crédito: Diamond Light Source Ltd

Un equipo internacional de investigadores ha descubierto un sitio nuevo y altamente conservado en el virus SARS-CoV-2 que puede ser neutralizado por un anticuerpo específico. Estudios anteriores han informado que los anticuerpos que bloquean la interacción del virus con el receptor humano (ACE2) tienen un efecto neutralizador significativo y pueden usarse para salvar la vida de pacientes críticamente enfermos. Sin embargo, este estudio reciente publicado en Biología estructural y molecular de la naturaleza describe una diana diferente que se puede unir en sinergia con anticuerpos bloqueadores de ACE2 para un efecto neutralizante más fuerte. Junto con un grupo en un hospital en Taiwán, el equipo utilizó el Electron Bio Imaging Center (eBIC) en el sincrotón nacional del Reino Unido, Diamond Light Source, para identificar anticuerpos de un paciente convaleciente que podrían crear un potencial real para un objetivo farmacológico.

Los anticuerpos son parte de las defensas del cuerpo contra las infecciones. Son proteínas que se unen a patógenos como los virus impidiendo que entren en contacto con las células humanas. Las terapias con anticuerpos se han mostrado prometedoras en el tratamiento de COVID-19, especialmente para pacientes extremadamente enfermos. Los anticuerpos recolectados de personas que se recuperan de la enfermedad pueden inyectarse en pacientes con COVID-19 y pueden reducir significativamente la gravedad de la enfermedad y disminuir los posibles efectos a largo plazo. También hay evidencia de que la terapia con anticuerpos puede prevenir el desarrollo de síntomas graves cuando se administra antes de que una persona se infecte.

Los científicos pudieron aislar un anticuerpo llamado EY6A de un paciente que se recuperaba de COVID-19. Los estudios de biología estructural posteriores revelaron que EY6A se unía a un nuevo objetivo en el virus SARS-CoV-2 y demostró una nueva forma de prevenir la propagación de COVID-19. "Este hallazgo es valioso porque proviene de un paciente real que tenía el virus. Y el descubrimiento de este nuevo objetivo significa que ahora son posibles terapias combinadas más efectivas que atacan al virus en diferentes puntos", comenta uno de los autores, el Prof. Dave Stuart, director de ciencias biológicas en Diamond Light Source y director adjunto de biología estructural en la Universidad de Oxford.

"Aumentar el número de sitios diana que pueden bloquearse en el SARS-CoV-2 también significa que hay una menor probabilidad de que las mutaciones que impiden la unión del anticuerpo comprometan los tratamientos. Incluso si un sitio de unión muta y ya no puede neutralizarse, la segunda unión el sitio todavía puede prevenir la infección ", añade.

La investigación de Diamond se centra en objetivos farmacológicos para COVID-19. La atención se centra principalmente en los picos de virus, la unión al receptor y la proteasa principal. Una parte específica de su trabajo, en conjunto con la Universidad de Oxford, ha sido observar estos picos en el exterior del virus.

Dependiendo de su función, los diferentes sitios de unión de los anticuerpos pueden ser más o menos propensos a la mutación. Si la secuencia de la proteína no es importante, una mutación aleatoria podría cambiar la estructura, lo que significa que los anticuerpos ya no pueden unirse, pero el virus sigue siendo infeccioso. Una de las principales preocupaciones sobre el uso de anticuerpos como terapia es que si se usan demasiado, pueden obligar a los virus a mutar y hacer que el tratamiento con anticuerpos sea inútil. En este nuevo estudio, los investigadores encontraron que la secuencia de aminoácidos del objetivo recién descubierto está altamente conservada, lo que significa que es la misma en todos los virus que se han secuenciado hasta ahora. Esto significa que la región es importante y es probable que los cambios afecten negativamente al virus, lo que lo convierte en un candidato más seguro para la terapia con anticuerpos.


Prueba de anticuerpos (serología) para COVID-19: información para pacientes y consumidores

Las pruebas de anticuerpos contra el SARS-CoV-2 (a menudo denominadas serología) buscan anticuerpos en una muestra para determinar si una persona ha tenido una infección anterior con el virus que causa el COVID-19. Las pruebas de anticuerpos COVID-19 pueden ayudar a identificar a las personas que pueden haber sido infectadas con el virus SARS-CoV-2 o que se han recuperado de una infección por COVID-19.

En este momento, los investigadores no saben si la presencia de anticuerpos significa que usted es inmune al COVID-19 o si es inmune, cuánto durará.

En las personas que han recibido una vacuna COVID-19, no se recomienda la prueba de anticuerpos para determinar si es inmune o está protegido contra COVID-19.

Actualmente se están desarrollando o están disponibles muchas pruebas de anticuerpos para detectar anticuerpos contra el SARS-CoV-2. Sin embargo, no todas las pruebas de anticuerpos que se comercializan al público han sido evaluadas y autorizadas por la FDA. Para obtener detalles sobre las pruebas específicas autorizadas por la FDA, consulte los EUA de diagnóstico in vitro.

En esta página:

Anticuerpos y pruebas de anticuerpos: conceptos básicos

P: ¿Qué son los anticuerpos?

R: Los anticuerpos son proteínas producidas por el sistema inmunológico para combatir infecciones como los virus y pueden ayudar a prevenir futuras ocurrencias de esas mismas infecciones. Los anticuerpos pueden tardar días o semanas en desarrollarse en el cuerpo después de la exposición a una infección por SARS-CoV-2 (COVID-19) y se desconoce cuánto tiempo permanecen en la sangre.

P: ¿Se utilizan pruebas de anticuerpos para diagnosticar COVID-19?

R: No. Una prueba de anticuerpos no detecta la presencia del virus SARS-CoV-2 para diagnosticar COVID-19. Estas pruebas pueden dar un resultado negativo incluso en pacientes infectados (por ejemplo, si los anticuerpos aún no se han desarrollado en respuesta al virus) o pueden generar resultados falsos positivos (por ejemplo, si se detectan anticuerpos contra otro tipo de coronavirus), por lo que no debe usarse para evaluar si actualmente está infectado o si es contagioso (capacidad de infectar a otras personas).

P: Si las pruebas de anticuerpos no se pueden usar para diagnosticar COVID-19, ¿qué pruebas están disponibles para eso?

R: Actualmente, existen dos tipos de pruebas de diagnóstico para COVID-19:

  • Pruebas moleculares (RT-PCR), que detectan el material genético del virus.
  • Pruebas de antígenos que detectan proteínas específicas en la superficie del virus.

Las pruebas moleculares y de antígenos pueden detectar si tiene una infección activa por coronavirus. Si obtiene un resultado positivo en cualquier tipo de prueba, debe seguir las pautas de los CDC para protegerse y proteger a los demás.

Las pruebas moleculares y de antígenos se realizan utilizando muestras tomadas principalmente de la nariz y la garganta con un hisopo largo u otras muestras respiratorias.
Para obtener más información sobre los diferentes tipos de pruebas, consulte:

Comprensión de los resultados de la prueba de anticuerpos

P: ¿Qué significa una prueba de anticuerpos positiva?

R: Si tiene un resultado positivo en una prueba de anticuerpos contra el SARS-CoV-2, es posible que haya tenido COVID-19 recientemente o anteriormente. También existe la posibilidad de que el resultado positivo sea incorrecto, lo que se conoce como falso positivo. Pueden ocurrir pruebas falsas positivas:

  • Porque las pruebas de anticuerpos pueden detectar otros coronavirus además del SARS-CoV-2, como los que causan el resfriado común.
  • Cuando la prueba se realiza en una población sin muchos casos de infecciones por COVID-19. Estos tipos de pruebas funcionan mejor en poblaciones con tasas más altas de infección.
P: ¿Una prueba de anticuerpos positiva significa que soy inmune al COVID-19?

R: Una prueba de anticuerpos positiva no significa necesariamente que usted sea inmune a la infección por SARS-CoV-2, ya que no se sabe si tener anticuerpos contra el SARS-CoV-2 lo protegerá de infectarse nuevamente. Tampoco indica si puede infectar a otras personas con SARS-CoV-2.

P: ¿Qué significa una prueba de anticuerpos negativa?

R: Un resultado negativo en una prueba de anticuerpos contra el SARS-CoV-2 significa que no se detectaron anticuerpos contra el virus en su muestra. Podría significar:

  • No ha sido infectado con COVID-19 anteriormente.
  • Tuvo COVID-19 en el pasado pero no desarrolló o aún no ha desarrollado anticuerpos detectables. Se desconoce si todas las personas infectadas desarrollarán una respuesta de anticuerpos detectable.
  • El resultado puede ser incorrecto, conocido como falso negativo. Esto ocurre cuando la prueba no detecta anticuerpos a pesar de que es posible que tenga anticuerpos específicos para el SARS-CoV-2.

Hay varias razones por las que los resultados negativos de la prueba de anticuerpos no indican con certeza que usted no tiene o no ha tenido una infección por SARS-CoV-2. Por ejemplo, si se le hace la prueba poco después de haber sido infectado con el SARS-CoV-2, la prueba puede ser negativa, porque el cuerpo necesita tiempo para desarrollar una respuesta de anticuerpos. También se desconoce si los niveles de anticuerpos disminuyen con el tiempo hasta niveles indetectables.

P: ¿Qué significan la sensibilidad y la especificidad en las pruebas de anticuerpos?
  • La sensibilidad es la capacidad de la prueba para identificar a las personas con anticuerpos contra el SARS-CoV-2. Esto se conoce como tasa positiva verdadera. Una prueba de alta sensibilidad identificará a la mayoría de las personas que realmente tienen anticuerpos y pocas personas con anticuerpos se pierden en la prueba (falsos negativos).
  • La especificidad es la capacidad de la prueba para identificar correctamente a las personas sin anticuerpos contra el SARS-CoV-2. Esto se conoce como la tasa negativa verdadera. Una prueba altamente específica identificará a las personas que realmente no tienen anticuerpos, y pocas personas sin anticuerpos serán identificadas como portadoras de anticuerpos por la prueba (falsos positivos).

La FDA ha incluido información sobre las expectativas de sensibilidad y especificidad para las pruebas serológicas del SARS-CoV-2 en las plantillas de serología EUA para laboratorios y fabricantes comerciales. Para obtener información sobre el rendimiento de la prueba serológica autorizada, consulte Rendimiento de la prueba serológica autorizada por la EUA.

P: ¿Qué significa valor predictivo positivo en las pruebas de anticuerpos?

Valor predictivo positivo es la probabilidad de que las personas que tienen un resultado positivo en la prueba realmente tengan anticuerpos. Los valores predictivos positivos para las pruebas de anticuerpos contra el SARS-CoV-2 se ven afectados por la frecuencia con la que se encuentran los anticuerpos contra el SARS-CoV-2 en la población que se está probando en un momento determinado.

Valores predictivos son probabilidades calculadas usando la sensibilidad y especificidad de una prueba, y una suposición sobre el porcentaje de individuos en la población que tienen anticuerpos en un momento dado (que se llama "prevalencia" en estos cálculos).

Cuanto menor sea la prevalencia, menor será el valor predictivo. Esto significa que las pruebas de anticuerpos COVID-19 con alta especificidad utilizadas en áreas con baja prevalencia (pequeña cantidad de personas que tienen anticuerpos SARS-CoV-2) tendrán un valor predictivo positivo menor que en un área con mayor prevalencia.

El valor predictivo positivo bajo puede llevar a que más personas obtengan un resultado falso positivo. Esto podría significar que es posible que las personas no hayan desarrollado anticuerpos contra el virus a pesar de que la prueba indicó que sí. Si no se puede lograr un valor predictivo positivo alto con un solo resultado de prueba, se pueden usar dos pruebas juntas para ayudar a identificar a las personas que realmente pueden ser positivas al anticuerpo del SARS-CoV-2.

P: ¿Qué sucede si obtengo resultados diferentes en dos pruebas de dos laboratorios diferentes? ¿A cuál debo creer?

R: Los resultados de la prueba de diferentes laboratorios pueden variar dependiendo de varios factores, como la precisión de la prueba en sí y también el tiempo que su cuerpo puede tardar en desarrollar anticuerpos después de haber tenido la infección por coronavirus, si de hecho estaba infectado. Por esta y otras razones, siempre debe revisar los resultados de su prueba con su proveedor de atención médica.

Información práctica sobre las pruebas de anticuerpos: quién las necesita, dónde conseguirlas

P: ¿Quién puede hacerse una prueba de anticuerpos?

R: Si tiene preguntas sobre si una prueba de anticuerpos es adecuada para usted, hable con su proveedor de atención médica o con los departamentos de salud estatales y locales.

P: Hay muchas pruebas de anticuerpos disponibles. ¿Cómo sé si necesito uno?

R: Hable con su proveedor de atención médica o con el departamento de salud local o estatal para analizar si la prueba de anticuerpos es adecuada para usted. La prueba de anticuerpos requiere una receta de un proveedor de atención médica.

P: ¿Dónde puedo hacerme una prueba de anticuerpos o una prueba de diagnóstico?

R: Las pruebas de detección de anticuerpos y las pruebas de diagnóstico están disponibles con receta médica de un proveedor de atención médica y pueden estar disponibles en los centros de pruebas y las instalaciones de atención médica locales. Comuníquese con su proveedor de atención médica o con su departamento de salud local o estatal para obtener más información.

P. Recibí una vacuna COVID-19. ¿Necesito una prueba de anticuerpos para saber si soy inmune al COVID-19?

R: No se recomiendan las pruebas de anticuerpos para determinar su nivel de inmunidad o protección contra COVID-19.

Si tiene preguntas sobre si una prueba de anticuerpos es adecuada para usted, hable con su proveedor de atención médica o con los departamentos de salud estatales y locales.

P: ¿Podré volver a trabajar sin que me hagan una prueba de anticuerpos?

R: Los requisitos para regresar al trabajo pueden ser determinados por su empleador o sus gobiernos estatales y locales. Pregúntele a su empleador sobre los criterios de su lugar de trabajo para regresar al trabajo y las acciones que su empleador tomará para prevenir o reducir la propagación de COVID-19 entre empleados y clientes. Para obtener información adicional, consulte las Pautas provisionales para las pruebas de anticuerpos COVID-19.


Los combos podrían ser una buena estrategia anti-variante

Las variantes emergentes de coronavirus son una de las razones más intrigantes para considerar mezclar vacunas. La administración de vacunas dirigidas a diferentes variantes proporcionaría una amplia inmunidad colectiva y limitaría la aparición de nuevas cepas posiblemente más peligrosas.

Es posible que las personas que actualmente están completamente vacunadas necesiten una tercera inyección para abordar las diferencias genéticas en las nuevas variantes. Cambiar de plataforma para esta vacuna de refuerzo, por ejemplo, si su primera ronda se basó en un vector viral, cambiar a ARNm o uno que esté basado en proteínas, podría ayudar a reforzar su respuesta inmune.

Las vacunas contra la influenza protegen de forma rutinaria contra múltiples cepas del virus de la influenza, pero generalmente son fabricadas por la misma empresa. En el futuro, este enfoque podría conducir a vacunas que contengan múltiples regiones de SARS-CoV-2 para proteger contra varias variantes, o regiones tanto de las proteínas del coronavirus como de la influenza, protegiendo contra ambos virus en una sola inyección.


Purificación de anticuerpos por afinidad específica de clase

Debido a que los anticuerpos tienen una estructura general conservada evolutivamente, que incluye dominios relativamente invariantes, y su función nativa implica la unión y defensa contra patógenos, no es de extrañar que ciertas bacterias patógenas hayan desarrollado proteínas que tienen funciones específicas de unión a anticuerpos. Varias de estas proteínas de unión a inmunoglobulinas se han identificado y aislado de determinadas especies de bacterias. De la misma manera que las funciones nativas de los anticuerpos son útiles como sondas específicas de diana para la investigación de proteínas, también estas proteínas anti-Ig nativas son útiles como ligandos de afinidad para la purificación de anticuerpos.

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Ligandos de unión a anticuerpos de proteína A, G y L

La proteína A, la proteína G y la proteína L son tres proteínas bacterianas cuyas propiedades de unión a anticuerpos han sido bien caracterizadas. Estas proteínas se han producido de forma recombinante y se han utilizado de forma rutinaria para la purificación por afinidad de tipos de anticuerpos clave de una variedad de especies. La mayoría de las formas recombinantes disponibles comercialmente de estas proteínas tienen secuencias innecesarias eliminadas (incluido el dominio de unión a HSA de la proteína G) y, por lo tanto, son más pequeñas que sus contrapartes nativas. Una forma recombinante de Proteína A y Proteína G diseñada genéticamente, llamada Proteína A / G, también está ampliamente disponible. Los investigadores utilizan de forma rutinaria las cuatro proteínas de unión a Ig recombinantes en numerosas aplicaciones de inmunodetección e inmunoafinidad.

Fuentes y características de las proteínas de unión a Ig nativas. La información de esta tabla se recopila de varias fuentes. Consulte las páginas relacionadas "Obtenga más información" para obtener referencias y detalles sobre las formas recombinantes utilizadas para las aplicaciones de inmunoafinidad.
Proteína A (SpA)Proteína G (SpG)Proteína L (SpL)
EspeciesEstafilococo
aureus
Estreptococo spp.
(Grupo C y G)
Peptostreptococcus magnus
Humano
Patología
Componente de la flora del cuerpo humano que causa las infecciones por "estafilococos"Orig. aislado de pacientes con faringitis (amígdalas o sangre)Bacterias Gram-positivas anaerobias comensales y / o patógenas
Nativo
Talla (s)
40 a 60 kDa
(número variable de dominios repetidos)
40 a 65 kDa
(número variable de dominios repetidos)
76 kDa
Dominios vinculantes5 para IgG (forma más común)1 a 2 para IgG
0 a 2 para HSA
5 para Ig
Objetivo de unión a Igregión constante de cadena pesada (Fc) de IgG (región CH2-CH3)cadena pesada const. región (Fc) de IgG (región CH2-CH3)cadenas ligeras kappa de Igs (VL-kappa)

Sitios de unión de proteínas de unión a anticuerpos. Las proteínas utilizadas para inmovilizar anticuerpos contra el soporte de perlas muestran especificidad para diferentes dominios de anticuerpos. Las proteínas A y G se unen a las cadenas pesadas de la región Fc del anticuerpo, mientras que la proteína L se une específicamente a las cadenas ligeras de las dos regiones Fab del fragmento de anticuerpo F (ab ') 2. † La proteína G también puede unirse a fragmentos Fab en determinadas condiciones.

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Purificación de anticuerpos con proteínas A, G y L

Para lograr la purificación de anticuerpos con Proteína A, Proteína G, Proteína A / G o Proteína L, se inmovilizan covalentemente sobre resinas porosas (como agarosa en perlas) o perlas magnéticas. Debido a que estas proteínas contienen varios dominios de unión a anticuerpos, casi todas las moléculas inmovilizadas individuales, sin importar su orientación, mantienen al menos un dominio de unión funcional y sin obstáculos. Además, debido a que las proteínas se unen a los anticuerpos en sitios distintos del dominio de unión al antígeno, las formas inmovilizadas de estas proteínas se pueden usar en esquemas de purificación, como la inmunoprecipitación, en los que la proteína de unión al anticuerpo se usa para purificar un antígeno de una muestra mediante unir un anticuerpo mientras está unido a su antígeno.

Las proteínas A, G, A / G y L tienen diferentes propiedades de unión, que hacen que cada una sea adecuada para diferentes tipos de dianas de anticuerpos (por ejemplo, subclase de anticuerpos o especies animales). It is important to realize that use of Protein A, G or L results in purification of general immunoglobulin from a crude sample. Dependiendo de la fuente de la muestra, el anticuerpo específico del antígeno puede representar solo una pequeña porción de la inmunoglobulina total en la muestra. Por ejemplo, generalmente solo el 2–5% de la IgG total en el suero de ratón es específica para el antígeno utilizado para inmunizar al animal.

Usando una columna de resina de agarosa de proteína A y suero de conejo como ejemplo, el procedimiento general para la purificación de anticuerpos con estos ligandos es el siguiente:



Comentarios:

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